靶細胞萃取技術或成為中藥材活性篩選之“利器”

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作者：追求來源：CPhI制藥在線

2017-05-31

生物活性篩選/化學成分在線分析技術是由生命科學與色譜、質(zhì)譜分離鑒定技術交叉形成的一種綜合技術，當前已逐漸發(fā)展成為中藥活性成分篩選和藥效物質(zhì)基礎研究的重要手段之一。基于整體觀的生物活性篩選/化學在線分析方法為中藥復雜體系的藥效物質(zhì)基礎研究提供了很好的思路和切入點，只要選擇好合適的靶細胞，再結合目前液質(zhì)聯(lián)用、高分辨質(zhì)譜技術，即可達到事半功倍之效果。

隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，中藥藥效物質(zhì)基礎研究已逐漸成為熱點。尤其是近年來中藥現(xiàn)代化已成為國家和中醫(yī)藥學術發(fā)展及中藥產(chǎn)業(yè)明確的奮斗目標，更促使中藥物質(zhì)基礎研究日益深入，中藥藥效物質(zhì)基礎研究的重要意義也為越來越多的研究者所認識。

中藥藥效物質(zhì)是指中藥發(fā)揮作用的化學成分（群），質(zhì)量控制的基礎與核心，它是闡明中藥作用的關鍵，是中藥是中藥材及其產(chǎn)品安全、有效和質(zhì)量可控的保障。由于中藥作用的整體性、復雜性，使得中藥藥效物質(zhì)基礎的闡明一直進展緩慢，成為制約中藥現(xiàn)代化、產(chǎn)業(yè)化和國際化進程的瓶頸。長期以來，大多數(shù)中藥藥效物質(zhì)基礎的研究模式有"化學成分-藥理活性法"和"活性導向分離法"，往往先進行分離、后鑒定，再結合藥理實驗以確定活性成分。實踐證明這兩種研究策略均存在操作繁瑣，周期長，效率低，成功率低等缺點[1]。因此，尋找適于中藥復雜體系藥效物質(zhì)基礎的研究方法頗具現(xiàn)實意義。

生物活性篩選/化學成分在線分析技術是由生命科學與色譜、質(zhì)譜分離鑒定技術交叉形成的一種綜合技術，當前已逐漸發(fā)展成為中藥活性成分篩選和藥效物質(zhì)基礎研究的重要手段之一。它利用藥物產(chǎn)生作用一般通過藥物與靶點結合的原理，將酶、受體、離子通道、神經(jīng)介質(zhì)、抗體、傳輸?shù)鞍?、DNA、肝微粒體等在生命活動中起重要生理作用的活性生物大分子、活性細胞膜甚至活性細胞作為靶標，建立中藥藥效物質(zhì)基礎的生物活性篩選/化學成分在線分析方法，能夠使效應成份的分離與篩選相結合，當中藥中成分與之相結合時，由于不同成分作用程度的差別或與靶標具有不同的結合性能，根據(jù)這種差別并結合高分離效能的高效液相色譜、高分辨率的質(zhì)譜檢測技術，就可以實現(xiàn)中藥生物活性篩選和化學分離分析同步，縮短了分析時間和工作量。目前其在國內(nèi)外已有越來越廣泛的應用。

董倩倩等[2]利用靶細胞提取和高效液相飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用分析預測了丹參中的活性成分，具體方法為：將靶細胞和丹參樣品一起孵育培養(yǎng)，根據(jù)活性成分可以與靶細胞膜有特異性的結合或者進入靶細胞內(nèi)的原理，用HPLC-MS方法對培養(yǎng)后細胞破碎液中的成分進行分析，從加藥Raw264.7細胞和Ecv304細胞破碎液中檢測到丹參素、原兒茶醛、咖啡酸、丹酚酸D、紫草酸、迷迭香酸及丹酚酸B7中丹參中成分，在加藥的HL7702細胞破碎液中檢測出丹參素、原兒茶醛、咖啡酸及丹酚酸B4中丹參中的水溶性成分，結果顯示：細胞破碎液中檢測的成分為丹參在靶細胞中有吸收的成分。呂燕妮，錢貽崧等[3]應用靶細胞提取聯(lián)用高效液相飛行時間質(zhì)譜法分析丹紅注射液中的活性成分，并對其防治疾病的分子機制做生物信息學預測。從小膠質(zhì)細胞（BV2）細胞破碎液中檢測到丹參素、原兒茶醛、6-羥基紅花黃色素A、迷迭香酸，丹酚酸B5中丹紅注射液中水溶性成分，初步闡明了該中藥注射劑藥效物質(zhì)基礎。王磊等[4]通過靶細胞萃取聯(lián)用UPLC/Q-TOF-MS法對延胡索中的藥效成分進行篩選，篩選出了延胡索乙素、四氫小檗堿、延胡索甲素、鹽酸小檗堿、去氫延胡索甲素5種有效成分。楊珍，王媛等[5]利用T47D細胞/液質(zhì)聯(lián)用及分子對接篩選淫羊藿中具有雌激素樣作用的成分。檢測出淫羊藿中可與T47D細胞結合的淫羊藿苷、淫羊藿次苷-Ⅰ等7個成分.

綜上所述，基于整體觀的生物活性篩選/化學在線分析方法為中藥復雜體系的藥效物質(zhì)基礎研究提供了很好的思路和切入點，只要選擇好合適的靶細胞，再結合目前液質(zhì)聯(lián)用、高分辨質(zhì)譜技術，即可達到事半功倍之效果，克服以往先從中藥中分離單體或有效部位，再分析其藥效，致使分離與效應篩選脫節(jié)之弊端，成為中藥采有效成分篩選之新的"利器"。

參考文獻：

[1] 齊煉文，周建良，等.基于中醫(yī)藥特點的中藥體內(nèi)外藥效物質(zhì)組/化學集成表征新方法[J].中國藥科大學學報，2010（3）：195-202.

[2] 董倩倩，李萍，宋越，等.靶細胞提取和高效液相飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用分析預測丹參中的活性成分[J].分析化學，2007，35（5）：648-652.

[3] 呂燕妮，錢貽崧，付龍生.靶細胞提取聯(lián)用HPLC-TOF MS法分析丹紅注射液中的活性成分[J].中成藥，2015，37（12）：2691-2695.

[4] 王磊，王媛，等.基于靶細胞萃取的延胡索藥效成分的篩選和含量測定[J].藥物評價研究，2016，39（6）：990-994.

[5] 楊珍，王媛，等.基于細胞萃取及分子對接的淫羊藿中雌激素樣作用成分分析[J].中國實驗方劑學雜志，2016，22（20）：62-66.